Cómo reconstituir péptidos en el laboratorio

1. Temperatura ambiente antes de abrir. El liofilizado absorbe humedad del aire, y el agua que toma baja el contenido de péptido y puede restarle estabilidad; por eso el vial cerrado se deja llegar a temperatura ambiente, de preferencia en un desecador.^[1]
2. Disolvente según la carga. Se cuentan los residuos básicos y ácidos de la secuencia, como en el apartado siguiente. Si basta una concentración de 1 mg/mL o menos, el PBS a pH 7.0 a 7.4 suele disolver tanto los péptidos básicos como los ácidos.^[1]
3. Volumen para la concentración. La concentración en mg/mL es la masa del vial entre el volumen agregado.
4. Técnica aséptica. Se trabaja en un área limpia, con material estéril y toallitas con alcohol; en un vial multidosis no se deja una aguja clavada en el tapón, porque abre un paso directo a los microorganismos.^[5]
5. Tiempo para disolver. Puede tardar, a veces varias horas. Unos minutos de sonicación en baño de agua ayudan con las partículas grandes; calentar de más, no.^[1] La agitación con barra magnética o en agitador, en cambio, es lo que se usa en los estudios de agregación para acelerarla.^[3]
6. Revisión. La solución debe quedar transparente. Si queda turbia o con partículas, el apartado de problemas explica las causas.
7. Alícuotas. Se reparte en alícuotas, se rotulan con compuesto, concentración, disolvente y fecha, y se congelan; así cada una se descongela una sola vez, sin ciclos de congelación que dañan el péptido.^[2]

La solubilidad de un péptido depende sobre todo de su polaridad, y la primera pista está en la secuencia: se cuentan los residuos básicos, con el grupo amino del extremo N, y los ácidos, con el carboxilo del extremo C.^[1] Arg, Lys e His cuentan como básicos porque en las sales de trifluoroacetato quedan protonados.^[2] Es una indicación, no una predicción: la solubilidad en agua no se puede deducir sólo de la estructura.^[2]

El DMSO no se usa con péptidos que tengan cisteína libre ni junto con ácidos fuertes como el trifluoroacético.^[2]

La tabla siguiente aplica ese conteo a los péptidos del catálogo con sus extremos reales: un extremo acetilado no suma el amino, uno amidado no suma el carboxilo y, en los cíclicos, el Asp y la Lys que cierran el anillo no cuentan. Quedan fuera los compuestos en los que el conteo no aplica: tirzepatida y retatrutide llevan una cadena de ácido graso con grupos ácidos propios, la somatropina es una proteína de 191 aminoácidos, GHK-Cu y AHK-Cu son complejos con cobre, el glutatión tiene un enlace γ y un tiol libre, y NAD+ y 5-Amino-1MQ no son péptidos. De las mezclas, GLOW, KLOW y BPC-157 + TB-500 se leen por sus componentes, y el CJC-1295 sin DAC, que no tiene ficha propia, entra con su nombre.

Con agua bacteriostática, la solución del péptido queda con su alcohol bencílico, al 0.9 % o al 1.1 % según el vial; la del catálogo lleva 0.9 %.^[4] En un ensayo celular se incluye en el control de vehículo, o se usa agua estéril sin conservador si el ensayo no lo admite. La ficha del agua bacteriostática compara las dos.

Un vial multidosis ya perforado se fecha y se desecha a los 28 días, salvo que el fabricante indique otro plazo.^[5]

En masa, la concentración es la masa del vial entre el volumen: 10 mg en 2 mL dan 5 mg/mL. En molaridad se divide además entre la masa molar. Con Selank, de 751.9 g/mol, esos 5 mg/mL equivalen a 6.65 mM.

La calculadora de péptidos hace las dos cuentas con la masa molar de cada compuesto del catálogo, también en mezclas y en sentido inverso: el volumen que hace falta para una concentración dada.

Liofilizado, un péptido es bastante estable si se guarda bien; en solución se degrada poco a poco, aun estéril y sin oxígeno.^[1] La duración depende de la secuencia: los que tienen Asn, Gln, Cys, Met o Trp duran menos, y en solución también los que tienen Tyr.^{[1, 2]}